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    熒光顯微鏡使用方法|熒光顯微鏡使用步驟
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    北京長恒榮創科技

    時間 : 2021-02-24 22:00 瀏覽量 : 166

        熒光顯微鏡使用方法

        1、用窗簾遮蔽光線,關閉房間內的電燈,除去熒光顯微鏡的防塵罩,確保熒光顯微鏡燈室通風良好、無遮蓋。裝上汞燈燈箱,并轉動燈箱卡圈上的撥桿,將燈箱與鏡臂連接。

        2、將汞燈燈箱的電源插頭插入熒光電源箱后的插座,再將熒光電源箱的插頭插入220V外接電源。

        3、打開熒光顯微鏡電源開關,電壓表顯示出電源電壓,如電源電壓波動不大于額定電壓值的5%,即可按下啟動開關點燃汞燈,如因天氣太冷或電壓不穩定等原因,一次啟動未點燃汞燈,可以多按幾次。待超高壓汞燈弧光達到穩定狀態并達到Zda發光效率,即可開始工作。

        4、燈泡的使用調中:

        ①任選一塊標本放在熒光顯微鏡載物臺上。

        ②轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路,轉動濾色片組轉換手輪,將紫光(V)或藍光(B)或綠光(G)激發濾色片組轉入光路,并將25熒光物鏡轉入光路。

        ③調節粗微調手輪,將標本像調焦清晰。

        ④前后推動垂直照明器右邊的聚光鏡調焦推桿,使視場光欄成像清晰,轉動視場光欄撥桿將視場光欄收小,調節視場光欄調中螺釘使視場光欄居中,然后再將視場光欄開至Zda。

        ⑤轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路,前后調節燈箱上的聚光鏡撥桿,使汞燈的弧光在視場內成像清晰。

        ⑥調整燈箱上的燈泡水平調節螺釘和垂直調節螺釘,使汞燈的弧光居中。

        ⑦調整反光鏡水平調節螺釘和垂直調節螺釘,使光源的反射像與汞燈的弧光分開。

        ⑧轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路,此時視場照明均勻。

        5、熒光顯微鏡使用過程中熒光觀察:

        ①將熒光染色標本放到熒光顯微鏡載物臺上。

        ②將10x平場物鏡或25x熒光物鏡轉入光路,調節載物臺縱橫移動手輪,將標本移入光路。

        ③轉動濾光片轉換撥輪,將熒光染色標本所需要的激發濾光片組轉入光路。激發濾光片組編號刻在濾片組轉換撥輪上。濾光片選擇正確與否,是熒光顯微鏡能否得到正確應用的關鍵。選用濾光片時,必須遵守斯托克斯定律:激發濾光片的透射波長<雙色束分離器的透射波長<阻斷濾光片的透射波長。

        ④調節粗調手輪,當看清熒光圖像輪廓后,再用微調手輪調焦,直至看到清晰的熒光圖像。

        ⑤當需要得到較強的熒光圖像時,可轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路,可獲得較明亮的熒光圖像。

        ⑥當需要使用40x或100x熒光物鏡觀察時,應在標本和物鏡間加上甘油,油中不能有影響觀察的小泡或雜質。使用時可使甘油慢慢浸潤一會兒,然后輕輕左右來回轉動物鏡轉換器以排除氣泡。

        6、熒光顯微攝影

        由于熒光圖像一般均較明場觀察暗得多,所以進行熒光顯微攝影需要較長的曝光時間,在曝光時應注意避免熒光顯微鏡震動。為了縮短曝光時間,可選擇倍率較低的攝影目鏡或感光度較高的攝影膠片如ASA200以上或DIN24以上。

        熒光顯微鏡攝影技術對于記錄熒光圖像十分必要,由于熒光很易褪色減弱,要即時攝影記錄結果。方法與普通顯微攝影技術基本相同。因紫外光對熒光猝滅作用大,如FITC的標記物,在紫外光下照射30s,熒光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統裝置。

        7、熒光圖像的記錄方法

        熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態學特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結果時,必須將二者結合起來綜合判斷。結果記錄根據主觀指標,即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察,基本上是可靠的。

        8、熒光顯微鏡使用結束,關閉所有電源,做好鏡頭和載物臺的清潔工作,待燈室冷卻至室溫后,用防塵罩蓋好顯微鏡,并做好使用記錄。

        熒光顯微鏡使用步驟

        1.關閉房間內的電燈,開啟顯微鏡汞燈;

        2.根據樣品標記的熒光素選擇相應的濾光片;

        3.放好樣品,找到合適的視野;

        4.如需拍照,請確認照相機內已裝好彩色膠卷(最好使用27定膠卷);

        5.開啟自拍裝置,選擇手動檔,通常拍攝速度在0.5-10秒內;

        6.使用結束,關閉所有電源并做好使用記錄。

        熒光顯微鏡使用注意事項

        1、嚴格按照熒光顯微鏡說明書要求進行操作,不要隨意改變程序。

        2、熒光顯微鏡應在暗室中進行檢查。進入暗室后,接上電源,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發出強光穩定后,眼睛完全適應暗室,再開始觀察標本。

        3、防止紫外線對眼睛的損害,在調整光源時應戴上防護眼鏡。

        4、檢查時間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發光強度逐漸下降,熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱;所以,Z多不得超過2~3h。

        5、熒光顯微鏡光源壽命有限,標本應集中檢查,以節省時間,保護光源。天熱時,應加電扇散熱降溫,新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時,須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應避免數次點燃光源。

        6、標本染色后立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發。

        7、熒光亮度的判斷標準:一般分為四級,即“-”表示無或可見微弱熒光?!?”表示僅能見明確可見的熒光?!?+”表示可見有明亮的熒光?!?++”表示可見耀眼的熒光。

        8、其它注意事項、熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態學特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結果時,必須將二者結合起來綜合判斷。熒光顯微鏡攝影技術對于記錄熒光圖像十分必要,由于熒光很易褪色減弱,要即時攝影記錄結果。


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